目的研究细胞色素P450表氧化酶基因转染和直接加入EETs对内皮细胞eNOS 表达及其在Thr-495位磷酸化的影响.方法在原代培养的牛主动脉内皮细胞中,分别加入生理浓度的8,9-EET(100 nmol*L-1)、11,12-EET(100 nmol*L-1)、14,15-EET(100 nmol*L-1)孵育4 h,或直接用重组腺相关病毒介导的花生四烯酸表氧化酶转染牛主动脉内皮细胞2 wk,以产生内源性EETs,用Western blot法检测总eNOS蛋白的表达及eNOS Thr-495磷酸化的水平;此外,从大鼠尾静脉注射真核表达质粒pCB6、pCB6.2C11OR、pCB6.2J2和pCB6.F87V,2 wk后检测大鼠主动脉总eNOS表达及eNOS Thr-495磷酸化的水平.结果与空白和溶媒组比较,外源性EETs明显促进内皮细胞总eNOS表达,增加eNOS Thr-495的磷酸化,而CYP450抑制剂(17-ODYA)则可明显降低eNOS表达和eNOS Thr-495的磷酸化水平;与相应的对照组比较,体内和体外转染不同的表氧化酶基因均能明显上调内皮细胞eNOS的表达,增加eNOS Thr-495的磷酸化水平.结论 EETs和CYP表氧化酶不仅能明显促进血管内皮细胞总eNOS蛋白的表达,而且还通过其翻译后修饰来增加其Thr-495位蛋白磷酸化水平.
作者：蒋建刚；陈积雄；王红；邓良刚；陈瑞娟；汪道文
来源：中国药理学通报 2004 年 20卷 4期
