目的 研究天麻素(gastrodin)在甲基苯丙胺(metham-phetamine,METH)诱导SH-SY5Y细胞自噬中的作用,并探讨其作用机制.方法 体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,不同浓度的 METH(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mmol· L-1)处理SY5Y细胞,并在6、12、24、48 h观察SY5Y细胞自噬的情况,确定自噬的最佳浓度和时间点.提前1h给予1 mmol·L-1天麻素进行干预,用显微镜观察细胞形态变化,采用激光共聚焦显微镜观察LC3-Ⅱ的改变,Western blot检测天麻素干预前后LC3-Ⅱ、Beclin-1以及Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的表达情况.结果 随着METH浓度(0~3.0 mmol ·L-1)的增加,SY5Y细胞逐渐变圆、突起逐渐变短、消失,同时部分细胞质内可见大小不等的空泡结构形成,细胞间隙逐渐增宽,最终细胞呈漂浮状态.随着 METH 浓度的增加, SY5Y细胞LC3-Ⅱ表达水平逐渐增强.激光共聚焦显微镜结果显示,天麻素+METH组LC3-Ⅱ的表达水平比METH组降低.与对照组相比,METH组LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平明显增强(P<0.01),mTOR和Akt差异无显著性,p-mTOR、p-Akt表达水平明显降低(P<0.01);给予天麻素干预后,与METH组相比,LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平降低,而mTOR、p-mTOR、Akt、p-Akt表达水平升高.结论 METH可诱导SY5Y细胞自噬,天麻素可减弱METH诱导的SY5Y细胞自噬
作者:杨根梦;李娟;洪仕君;薛凤麟;何永旺;周一卿;曾晓锋;李利华
来源:中国药理学通报 2018 年 34卷 4期