目的:探讨全反式维 A 酸(atRA)对小鼠胚胎腭间充质细胞(MEPM)成骨分化的影响及其机制。方法分离培养 MEPM 细胞,在成骨诱导(OM)培养基中分别加入 atRA 0.1和1.0μmol??L-1,分别于培养1,3,5,7和9 d 用 MTT 法测定细胞存活率,化学比色法检测碱性磷酸酶( ALP)活性。培养21 d 后,Von ̄Kossa染色观察矿化面积比。培养9 d 后,逆转录 PCR(RT ̄PCR)检测成骨相关基因 Runx2、骨桥蛋白以及骨形态发生蛋白受体(Bmpr)1b, Bmpr2和 Smad5 mRNA 的表达水平。结果培养9 d 后,与正常对照组相比,OM 及 OM+atRA 0.1和1.0μmol??L-1组细胞存活率明显降低(P<0.05);OM 组细胞 ALP 活性最高,OM+atRA 1.0μmol??L-1组 ALP 活性明显低于 OM 组(P<0.05)。培养21 d 后,Von ̄Kossa 染色结果显示,OM+atRA 1μmol??L-1组矿化结节面积比为(3.56±1.24)%,明显低于 OM 组(10.33±2.29)%( P <0.05)。培养9 d 后,OM 组的 Runx2相对表达各组内最高,OM+atRA 1.0μmol??L-1组与其相比约下调20%(P<0.05)。与正常对照组相比,OM 组、OM+atRA 0.1和1.0μmol??L-1组骨桥蛋白 mRNA 表达明显升高(P<0.05)。 OM 组的 Bmpr1b mRNA 表达水平为正常对照组的1.6倍,OM+atRA 1.0μmol??L-1组的相对表达仅为OM 组的33%(P
作者:陈沐;杨旭;李正明;刘学;王伟财;黄洪章
来源:中国药理学与毒理学杂志 2015 年 5期