目的 探索血管内皮细胞一氧化氮合成酶(eNOS)基因多态性对其产生一氧化氮能力的影响及其与缺血性股骨头坏死(ANFH)发病机制的相关性.方法 分别将含894G和894T的eNOS全长CDS片段亚克隆到慢病毒表达载体,转染到血管内皮细胞(HUVEC),在不同时间点检测细胞培养上清中一氧化氮(NO)和鸟苷酸环化酶(cGMP)的含量;用脂质体介导荧光素酶标记的报告质粒pNF-κB-luc与内参对照质粒pRL-TK共转染经LV-eNOS-894G和LV-eNOS-894T及对照慢病毒(LV-NC)转染的HUVEC细胞,待48 h后Western blot法检测各组HUVEC细胞内核因子-κB(NF-κB)、eNOS的蛋白表达.将上述各组HUVEC细胞分别与人成骨细胞hFOB1.19共培养,不同时间点检测细胞培养上清中碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)的浓度.结果 转染eNOS基因(含894G或894T)全长表达慢病毒的细胞培养上清中NO含量和cGMP的含量明显高于空白对照组和空载体组,且894G组NO和cGMP含量显著高于894T组(P＜0.01);与空白对照组相比,转染了eNOS基因的细胞中NF-κB/p65和eNOS蛋白表达水平显著增多,且894G组显著高于894T组;上述各组HUVEC细胞分别与hFOB1.19成骨细胞共培养,在同一时间点,转染eNOS基因(含894G或894T)全长表达慢病毒的细胞培养上清中ALP和OCN浓度明显高于空白对照组和空载体组,且894G组的ALP

作者：郑力文；王万春；毛新展；倪江东；魏建伟；陈丁；李丁；毛敏之

来源：中国医师杂志 2019 年 21卷 5期