目的 克隆大鼠谷氨酸受体2(GluR2)基因片段,构建重组表达质粒,在原核系统诱导表达,制备多克隆抗体,分析GluR2与caspase3的相互作用.方法 从大鼠脑组织提取总RNA,实时聚合酶链反应(RT-PCR)扩增GluR2基因抗原性较强的一段,定向克隆入表达载体pGEX-4T1,构建GST-GluR2融合蛋白表达质粒,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达GluR2蛋白.用SDS-PAGE方法 分离目的 蛋白,免疫家兔,制备抗血清.用Western Blot方法 鉴定抗体的特异性,用Co-IP实验分析GluR2和caspase3的相互作用.结果 SDS-PAGE显示GST-GluR2融合蛋白诱导表达成功;Western Blot显示制备的多克隆抗体具有较高的特异性;Co-IP显示大鼠脑组织中GluR2和caspase3存在相互作用.结论 成功获得兔抗鼠GluR2特异性抗血清;脑组织中GluR2和caspase3存在相互作用,为进一步研究神经毒作用导致GluR2下调的分子机制奠定基础.
作者：安国顺；李淑艳；闫琦；周允；贾弘蜒；倪菊华
来源：中国药物与临床 2008 年 8卷 11期
