目的 采用体外锚蛋白(AnkG)启动子介导荧光素酶报告基因活性的研究,探讨丙戊酸钠(VPA)对AnkG启动子活性的调控机制.方法 通过对人和小鼠的AnkG启动子序列进行比对分析,克隆小鼠AnkG启动子序列;将AnkG启动子片段克隆至荧光素酶报告基因(Luciferase)质粒pGL3,构建真核表达载体;采用脂质体Lipofectamine2000将重组质粒和空载体质粒分别与pRL-CMV共转染至N2a细胞和293T细胞,同时给予0、0.5、1.0 mmol/L的VPA处理12 h后,采用双荧光素酶法检测AnkG启动子片段在细胞中的转录活性及VPA处理后细胞中荧光素酶报告基因的活性.结果 酶切和测序鉴定证实AnkG启动子克隆及其表达载体构建成功;荧光素酶活性检测显示AnkG启动子在N2a和293T细胞中均有较高的转录活性;0.5 mmol/L VPA处理两种品系细胞12h后,Luciferase活性都明显上调.结论 VPA能够从转录水平调控AnkG启动子的活性,体内VPA对AnkG表达的调控可能是直接在转录水平进行的.
作者：刘翠；武杰；隋小龙；李彦红；韩云林；徐玉环；黄澜；朱华；盛树力
来源：中国医学科学院学报 2015 年 37卷 5期
