目的 优化核苷磷酸化酶(包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶)基因工程菌的发酵表达条件.方法 通过工程菌摇瓶培养,测定吸光度D值,考马斯亮蓝(Bradford)法测定蛋白,SDS-PAGE电泳和凝胶成像扫描分析表达量,优化表达条件;通过正交试验优化50 L发酵罐发酵条件.结果 摇瓶培养起始pH为7.0～7.2,于30℃培养4h,加入终浓度为0.4 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导8h后收获菌体,可得到较高的生物量和重组酶蛋白表达量.50 L发酵罐的最佳条件为起始pH为7.0～7.2,于32℃培养4h,加入终浓度为0.4 mmol/L的IPTG诱导9h后收获菌体,每升发酵液可得2 g以上的酶蛋白.结论 基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶产量较高,可工业化生产,为酶法合成核苷酸类似物的研究奠定了基础.
作者：黄炯威；莫世艺；刘宁；梁剑锋；刘桂祯
来源：中国药业 2014 年 23卷 7期
