目的 构建乳腺癌特异性转导小肽PI-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白的原核表达载体,并进行目的 蛋白的表达、分离和纯化.方法 合成PI的DNA序列,将其定向插入到pEGFPN2中,经双酶切获取PI-EGFP的核苷酸序列,再将其克隆入原核表达质粒pET-28a(+),构建出pET-28a(+)-PI-EGFP的原核表达载体:重组质粒转化BL2l(DE3)pI.ysS感受态细胞,经IPIG诱导表达,利用His-tag对蛋白进行分离纯化,SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹免疫分析(Western blot)鉴定纯化蛋白质.结果 成功构建了pET-28a(+)-PI-EGFP的原核表达载体;其经诱导后,在大肠杆菌中高效表达,目的 蛋白以可溶性形式存在;SDS-PAGE分析显示,在相对分子量约33 kD的位置出现目的 蛋白条带,与理论值相符:经His TALONTM Cartridge亲和层析纯化获得了高纯度的重组的PI-EGFP融合蛋白,Western blot鉴定结果显示获得了目的 蛋白.结论 成功构建出乳腺癌特异性转导小肽P1-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白原核表达载体,并能够表达出PI-EGFP的融合蛋白,为进一步研究小肽的乳腺癌特异性转导功能奠定基础.
作者：高嫦娥；洪敏；刘为青；何敏洁；缪延栋；王苗；吕加令；董坚
来源：中国医药生物技术 2010 年 05卷 3期
