目的构建和筛选能高效、特异性抑制人 GSK-3β基因表达的 siRNA 表达载体，探讨其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。
<br> 方法提取人 L02细胞总 RNA，RT-PCR 扩增 GSK-3β基因序列，克隆至 pSEB-HUS 真核表达载体，构建 pSEB-G重组质粒。将设计、合成的3条靶向 GSK-3β基因编码区的 siRNA 及阴性对照分别克隆至 pSEB-G，构建 siRNA 表达载体 pSEB-si1-G、pSEB-si2-G、pSEB-si3-G 及 pSEB-siN-G。将 siRNA 表达载体瞬时转染 HepG2细胞，通过绿色荧光信号、RT-PCR 和 Western blot 观察和检测其对 GSK-3β基因的抑制效果，MTT 实验和 caspase-3活性分析检测其对 HepG2细胞增殖和凋亡的影响。
<br> 结果经双酶切及测序证实，所构建 siRNA 表达载体目的基因大小、序列与预期相符。瞬时转染 HepG2细胞后，其中的 pSEB-si1-G 能使细胞中绿色荧光信号明显减少，可显著抑制 GSK-3βmRNA 的表达及蛋白的合成，并使 HepG2细胞增殖明显降低，caspase-3活性显著升高。
<br> 结论成功构建了靶向 GSK-3β基因的 siRNA 表达载体，沉默 GSK-3β能显著抑制 HepG2细胞的生长并诱导其发生凋亡。
作者：张娜；刘璐；窦玥莹；王真；宋丹青；李电东；邓洪斌
来源：中国医药生物技术 2015 年 2期
