目的:研究在酿酒酵母细胞内高表达大肠杆菌 UDP-葡萄糖合成途径的2个关键酶对工程酵母细胞的葡萄糖苷化反应活性的影响。方法利用 PCR方法获得大肠杆菌磷酸葡萄糖变位酶(PGM)和 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(GalU)基因,构建整合型表达载体,转化酵母;同时共表达具有催化黄酮葡萄糖苷化的 UDP-葡萄糖转移酶,研究摇瓶培养条件下PGM和 GalU 基因的表达对工程细胞生物催化黄酮类化合物葡萄糖苷化的影响。结果在酵母细胞内表达大肠杆菌 UDP-葡萄糖合成途径的2个关键酶 PGM和 GalU,提高了组合表达 UDP-葡萄糖转移酶的工程菌生物催化合成野黄芩素-7-O-葡萄糖苷的效率,表明PGM和GalU基因的高表达能促进 UDP-葡萄糖的合成;所构建的工程菌也能催化木犀草素、柚皮素、白杨素、汉黄芩素、木蝴蝶素 A、黄芩素、槲皮素以及大豆黄酮等黄酮类化合物的葡萄糖苷化。结论组合表达大肠杆菌 PGM 和 GalU 基因能促进酵母细胞内 UDP-葡萄糖的合成,进而提高了工程细胞催化合成黄酮葡萄糖苷的效率。
作者:王惠敏;杨燕;田雷瑜;周文龙;王伟
来源:中国医药生物技术 2016 年 11卷 3期