目的 建立一种基于均相时间分辨荧光(HTRF)技术的分析方法,用于快速、简便、稳定地检测阿达木单抗与TNF-α抗原的结合活性.方法 将检测试剂、梯度稀释的标准品及待测样品加入96孔板,孵育后在酶标仪上读取荧光信号值,用软件对信号值和抗体浓度进行四参数曲线拟合,根据标准品及待测样品的EC50值计算样品的相对结合活性;同时对方法的专属性、准确性、精密度、线性与范围及稳定性指示能力进行验证;此外对该方法与常规酶联免疫吸附法(ELISA)进行了对比研究.结果 建立的HTRF检测法呈典型的"S"型剂量-效应曲线;方法 验证结果显示,本法专属性强,相对结合活性的检测范围为50％～150％,在此范围内线性良好,相关系数在0.99以上,斜率接近1.0;平均回收率范围为92.5％ ～104.8％;重复性及不同人员之间精密度的CV均不超过15％;本法可反映加热破坏的单抗样品的结合活性变化趋势;对比研究显示,HTRF法与ELISA法测得的结果等效.结论 建立了一种新的检测阿达木单抗与TNF-α 结合活性的测定方法,该法经验证符合要求,可代替ELISA法用于该类单抗药物结合活性的测定,适用于细胞克隆筛选、原液或成品质量放行检测及稳定性研究等.
作者：邓春平；陈航；谢建华；刘翠华
来源：中国医药生物技术 2022 年 17卷 2期
