目的:利用脂肪酸去饱和酶基因fat-1改变细胞膜脂肪酸组成,进行大肠癌的基因治疗研究.方法:将fat-1基因插入腺病毒载体中,与骨架载体同源重组,构建腺病毒重组载体(Ad-GFP-fat1),通过包装细胞系(293)产生的腺病毒,感染人大肠癌株HT-29细胞.提取细胞的总RNA,以fat-1基因的反义mRNA作探针,用Northern Blot检测fat-1基因在HT-29细胞内的表达.以流式细胞仪对HT-29细胞G_0/G_1期、S期、G_2/M期所占比例进行检测.分析fat-1基因对HT-29细胞增殖和凋亡的影响.以气相色谱分析仪分析fat-1基因对HT-29细胞细胞膜n-6PUFAs和n-3 PUFAs含量及n-6/n-3PUFAs比例的影响.将HT-29细胞皮下接种于裸鼠右前肢腋下,建立裸鼠HT-29大肠癌细胞皮下移植瘤模型.成瘤后进行治疗实验,经连续5次治疗,于最后一次治疗后第3天处死小鼠,取肿瘤称重.分析fat-1基因裸鼠体内抗肿瘤效果.结果:通过基因重组技术,得到高滴度的含fat-1基因的重组病毒;腺病毒介导的fat-1基因能够在HT-29细胞中有效表达;fat-1基因的表达可降低HT-29细胞膜n-6/n-3PUFAs的比例,有效抑制HT-29细胞增殖,促进细胞凋亡并能抑制裸鼠移植瘤的发展.结论:fat-1基因的表达,可抑制HT-29细胞的体内外增殖并诱导细胞凋亡,在大肠癌基因治疗中可能具有良好利用价值.
作者:李茂刚;夏立建;葛银林;李馨
来源:中国肿瘤临床 2010 年 37卷 4期