目的:以携带shRNA 片段的腺病毒为载体,对结肠癌细胞SW480 中Survivin 基因的表达进行干扰,研究其对肿瘤细胞中Survivin 基因沉默效果及对细胞周期、凋亡和增殖的影响.方法:将构建好的携带Survivin-shRNA 片段腺病毒,体外转染结肠癌细胞株SW480 .以EGFP 为报告基因,采用流式细胞计数测定不同感染复数(MOI)下的转染效率,选取适当病毒浓度进行下一步实验.通过RT-PCR 和Western blot 检测基因沉默后结肠癌细胞内Survivin mRNA 和蛋白的表达水平;在Annexin V-FITC 和PI 染色后通过流式细胞术检测并分析Survivin 基因沉默后细胞周期和凋亡的变化;同时采用噻唑蓝(MTT)法、克隆增殖实验对细胞不同时期增殖活性进行观察,明确对细胞增殖的抑制时效性.结果:腺病毒转染后MOI 值在0 ～ 50 时,剂量与转染效率成正比,确定最佳MOI 值为50 并进行后续实验; shRNA 干扰后细胞内Survivin mRNA 和蛋白表达水平降低,较对照细胞组差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示基因沉默后细胞凋亡率升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).同时基因沉默后,细胞周期也有明显变化,表现为G1/S期细胞增多和G2/M期细胞减少,与对照细胞组相比差异有统计学意义(P<0.05).MTT 和单克隆平板实验均显示Survivin 基因的沉默,对细胞
作者：王学虎；傅仲学；赵渝；谌伟；吴星烨；王春毅
来源：中国肿瘤临床 2010 年 37卷 9期
