目的: 建立稳定表达sCD40L的CHO细胞系.方法:从含sCD40L的载体pDC316-sCD40L中,将sCD40L编码序列克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP,获得重组质粒pIRES2-EGFP-sCD40L,酶切及测序鉴定.电穿孔转染CHO细胞,G418筛选抗性克隆,有限稀释法获取单克隆后扩大培养.流式细胞术、倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达;使用PCR、RT-PCR、ELISA方法分别从DNA、mRNA、蛋白水平对sCD40L的表达进行检测.Western blotting检测CHO-sCD40L分泌的sCD40L与膜型CD40的结合;将CHO-sCD40L与MDA-MB-231细胞共孵育24 h后,流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面分子Fas的表达变化;加入Fas激活性抗体(CH-11)后观察 MDA-MB-231细胞的凋亡.结果:成功构建质粒pIRES2-EGFP-sCD40L,转染CHO细胞后经克隆化培养获得稳定表达sCD40L的细胞系CHO-sCD40L.流式细胞术、倒置荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达高达90
作者：蒋华蔚；任秀宝；于津浦；李慧；曹水
来源：中国肿瘤生物治疗杂志 2007 年 14卷 4期
