目的:制备可特异识别人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)膜抗原的单克隆抗体,筛选出亲和力较高并对胃癌细胞有明显抑制作用的克隆.方法:以高表达HER2膜抗原的人胃癌细胞系NCI-N87免疫BABL/C小鼠,免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/O融合,ELISA法筛选出HER2反应阳性克隆株,活细胞免疫荧光法检测获得膜阳性克隆株,使用抗体亚型鉴定试剂盒鉴定抗体亚型,MTT法检测抗体对NCI-N87细胞增殖的抑制,采用与群司珠单抗的夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定单抗结合HER2抗原的表位,免疫组化、Western blotting进一步检测抗HER2抗体在不同条件下与HER2抗原反应情况.结果:细胞融合产生1 442个单个集落的杂交瘤,重组HER2抗原ELISA筛选出HER2反应阳性克隆79株,活细胞免疫荧光检测获得较强膜阳性克隆7株,并测定其亚型,其中命名为15C15的1株属IgG1K类单抗,免疫竞争及结合实验显示15C15与群司珠人源化抗体识别不同的表位.细胞增殖筛选显示15C15能显著抑制人胃癌NCI-N87细胞的增殖,在80 μg/ml时抑制率可达34.8
作者：孙立新；冉宇靓；胡海；遇珑；周转；赵西路；杨治华
来源：中国肿瘤生物治疗杂志 2008 年 15卷 1期
