目的:利用毕赤酵母表达系统表达PD-L1-Ig融合蛋白,检测该融合蛋白的生物学活性.方法:化学合成hPD-L1-IgG4融合基因,构建携带该基因的酵母表达载体,转化GS115酵母菌株后分泌表达融合蛋白,亲和层析和离子交换层析法纯化,SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定.ELISA法检测融合蛋白与受体PD-1的结合能力,混合淋巴细胞反应检测融合蛋白对T细胞功能的抑制能力,~(51)Cr稀释法检测其对CTL杀伤人结肠癌SW480细胞效应的抑制作用.结果:成功构建酵母表达载体pPIC9K-PD-L1-IgG4,转化菌株分泌表达PD-L1-IgG4融合蛋白,相对分子质量为55 000,含量为120 μg/ml.发酵菌株,纯化制备融合蛋白.融合蛋白与受体PD-1具有良好的结合能力,能够显著抑制T细胞增殖、活化(P<0.01),并抑制CTL对结肠癌细胞的杀伤(P<0.01).结论:成功制备了酵母表达PD-L1-IgG4融合蛋白,该融合蛋白具有良好的生物学活性,为深入研究其在肿瘤免疫应答中的调控效应奠定了良好基础.
来源：中国肿瘤生物治疗杂志 2009 年 16卷 5期
