目的:设计并制备一种分别靶向B细胞表面抗原CD19和CD22的CAR-T细胞,检测其对肿瘤细胞的体内外杀伤效果.方法:将含有人源化CD19 ScFv的二代CAR分子和带有CD3s链作为共刺激结构域的CD22 ScFv CAR分子以P2A自剪切肽连接,序列连接于慢病毒载体pLTR-CMV-MCS中,以HEK-293T细胞包装相应的慢病毒载体,感染健康志愿者提供的T细胞制备CAR-19-22-T细胞,同时以相同二代结构分别构建单靶向CAR-T细胞作为参照.构建表达荧光素酶、CD19和/或CD22的前列腺癌3M细胞(靶细胞).将各种CAR-T细胞与靶细胞共同培养,采用荧光素酶化学发光法和ELISA法检测其对靶细胞的杀伤能力和细胞因子的分泌水平.通过尾静脉注射Raji-Luc细胞构建NOD-SCID免疫缺陷小鼠白血病模型,分别注射各组CAR-T细胞进行治疗并评估其疗效.结果:培养7 d的CAR-19-22-T细胞的CAR-19表达率为13.7%,CAR-22表达率为14.3%.CAR-19-22-T细胞在10:1效靶比时,对3M-CD19-Luc、3M-CD22-Luc和3M-CD19-CD22-Luc细胞的杀伤率均显著高于 T细胞[(78.1±14.4)%vs(11.1±4.3)%、(46.7±10.7)%vs(12.4±2.7)%、(90.5±4.3)%vs(14.3±3.7)%,均P<0.01];与 3M-CD19-Luc、3M-CD22-Luc、3M-CD19-CD22-Luc靶细胞共培养后,CAR-19-22-T 细胞 IFN-γ、TNF-α和 IL-2 水平均显著低于 C
作者:李薇;曾伟杰;彭浩;刘灿;刘广花;肖非笛;曾桂芳;梁晓;蔡车国;胡隽源;周明
来源:中国肿瘤生物治疗杂志 2022 年 29卷 7期