目的：利用噬菌体展示技术构建大鼠矽肺噬菌体单链抗体（ ScFv）库，为后续筛选矽肺特异性ScFv奠定基础。方法无特定病原体级雄性SD大鼠24只，予质量浓度为100 g／L的二氧化硅混悬液1．0 mL经支气管一次性灌注染尘，构建矽肺模型。于造模后第3、6、9和12周分别取6只大鼠周围血淋巴细胞混匀，以Trizol法提取总RNA，逆转录合成cDNA；利用简并引物进行聚合酶链式反应（PCR），扩增抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（ VL）的基因，用T4 DNA连接酶连接获得ScFv基因片段，将其与噬菌粒PCANTAB－5e重组，采用氯化钙转化法转化至感受态大肠埃希氏菌（E．coli）TG1中，经M13K07辅助噬菌体超感染，构建矽肺模型大鼠噬菌体ScFv库；随机挑取10个菌落进行质粒双酶切鉴定。结果矽肺模型大鼠周围血总RNA琼脂糖凝胶电泳可见2条明显28 S和18S条带，总RNA完整性较好；VH基因片段大小约为400 bp，VL基因片段大小约为350 bp，重组后ScFv基因片段长度约为750 bp；M13K07辅助噬菌体扩增后铺双层琼脂平板，见小米粒大小、透亮的噬菌斑，噬菌体滴度为1．35×1016 pfu／L；以重组噬菌粒转化感受态E．coli TG1后铺氨苄青霉素抗性固体平板，计算菌落数为8．0×109 cfu／L；阳性克隆质粒PCR和双酶切产物经琼脂糖凝胶电泳显示阳性插入
作者：张红义；郝长付；刘素娜；李娟；暴磊；侯建永；王迪；陈慧婷；姚武
来源：中国职业医学 2016 年 43卷 3期
