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目的 探究姜黄素抑制游离二氧化硅(SiO2)诱导的小鼠肺泡巨噬细胞(AM)内核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)炎性小体活化的分子机制.方法 取自无特定病原体C57BL/6小鼠支气管肺泡灌洗液中分离的AM分为6组;其中,对照组AM不予任何刺激;SiO2刺激组AM予终质量浓度为50 mg/L的游离SiO2混悬液刺激;核转录因子-κB(NF-κB)抑制组AM予终浓度为200 nmol/L的5-(4-氟苯基)-2-脲基噻吩-3-甲酰胺预处理1h,姜黄素低、中、高剂量组AM分别予终浓度为20、40、50 μmol/L的姜黄素预处理1h,其后均以终质量浓度为50 mg/L的游离SiO2混悬液刺激.孵育6h后收集样品,以实时荧光定量聚合酶链式反应法检测细胞内NLRP3炎性小体相关基因NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和白细胞介素(IL)-1β的mRNA表达;以酶联免疫吸附实验检测AM中成熟IL-1β(mIL-1β)和IL-18分泌水平;以免疫印迹法检测各组细胞中Caspase-1剪切体(cleaved Caspase-1)、IL-1β前体(pro-IL-1β)、mIL-1β蛋白的表达和分泌水平.结果 与对照组比较,SiO2刺激组AM中NLRP3、Caspase-1、IL-1β mRNA相对表达水平和mIL-1β、IL-18分泌水平,cleaved Caspase-1、pro-IL-1β、mIL-1β蛋白的相对表达水平与cleaved Caspase-1、mIL-1β蛋白的分泌水平均升

作者:宋楠楠;杜忠君;贾强;陈尚雅;朱文文;杨旭;侯珊珊;邵华

来源:中国职业医学 2020 年 47卷 2期

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宋楠楠;杜忠君;贾强;陈尚雅;朱文文;杨旭;侯珊珊;邵华
来源:
中国职业医学 2020 年 47卷 2期
标签:
姜黄素 二氧化硅 肺泡巨噬细胞 NLRP3 半胱氨酸蛋白酶-1 白细胞介素 核转录因子-κB 小鼠
目的 探究姜黄素抑制游离二氧化硅(SiO2)诱导的小鼠肺泡巨噬细胞(AM)内核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)炎性小体活化的分子机制.方法 取自无特定病原体C57BL/6小鼠支气管肺泡灌洗液中分离的AM分为6组;其中,对照组AM不予任何刺激;SiO2刺激组AM予终质量浓度为50 mg/L的游离SiO2混悬液刺激;核转录因子-κB(NF-κB)抑制组AM予终浓度为200 nmol/L的5-(4-氟苯基)-2-脲基噻吩-3-甲酰胺预处理1h,姜黄素低、中、高剂量组AM分别予终浓度为20、40、50 μmol/L的姜黄素预处理1h,其后均以终质量浓度为50 mg/L的游离SiO2混悬液刺激.孵育6h后收集样品,以实时荧光定量聚合酶链式反应法检测细胞内NLRP3炎性小体相关基因NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和白细胞介素(IL)-1β的mRNA表达;以酶联免疫吸附实验检测AM中成熟IL-1β(mIL-1β)和IL-18分泌水平;以免疫印迹法检测各组细胞中Caspase-1剪切体(cleaved Caspase-1)、IL-1β前体(pro-IL-1β)、mIL-1β蛋白的表达和分泌水平.结果 与对照组比较,SiO2刺激组AM中NLRP3、Caspase-1、IL-1β mRNA相对表达水平和mIL-1β、IL-18分泌水平,cleaved Caspase-1、pro-IL-1β、mIL-1β蛋白的相对表达水平与cleaved Caspase-1、mIL-1β蛋白的分泌水平均升