为探讨益母草碱(leonurine,Leo)对erastin诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)铁死亡的保护作用及其潜在机制,在体外构建erastin诱导的HK-2细胞铁死亡模型,检测Leo对铁死亡细胞活力、细胞状态、铁死亡相关指标及相关信号通路蛋白的影响.首先,体外培养HK-2细胞,CCK-8法检测 10、20、40、60、80、100 μmol·L-1的Leo对正常HK-2 细胞活性的影响,以此确定Leo的安全给药剂量范围;用铁死亡经典诱导剂erastin诱导铁死亡细胞模型并筛选出合适的造模浓度;CCK-8 法检测Leo(20、40、80 μmol·L-1)及阳性药铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1,1、2 μmol·L-1)对铁死亡模型细胞活性的影响,同时在相差显微镜下观察细胞形态学的变化.其次,通过 Western blot 法检测核转录因子 E2 相关因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)的入核激活情况,并筛选后续机制研究的最佳浓度;进一步用透射电镜观察铁死亡发生的特征性显微形态学改变,应用流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)变化,使用还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)测定试剂盒检测GSH含量.最后,采用Western blot法定量检测各组谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、通路蛋白p62 及Nrf2 下游蛋白血红素加氧酶 1(heme oxyge

作者：吴爱君；陈乃清；黄丽华；程冉；王晓婉；黎创；毛炜；黄清明；徐鹏；田瑞敏

来源：中国中药杂志 2023 年 48卷 8期