目的：探讨热疗诱导胃癌 MKN45细胞凋亡及其对胃癌细胞促凋亡蛋白PUMA表达的影响。方法体外复苏与培养人胃癌 MKN45细胞。对照组常温(37℃)下培养,实验组按不同时间分组43℃水浴加热胃癌 MKN45后培养24h,采用倒置显微镜和透射电镜观察热疗后胃癌细胞的形态结构变化。四甲基偶氮唑盐比色法(MMT )检测细胞增殖抑制。A O/EB荧光双染色法及 Annexin-V/PI双染色法流式检测细胞凋亡。Western blot检测促凋亡蛋白 PUMA蛋白表达。结果光镜观察发现热疗后 MKN45细胞明显皱缩、变圆及细胞漂浮,3 h多数细胞漂浮。电镜下可见热疗后 MKN45细胞核仁增多,胞核及胞浆出现大小不等的空泡和凋亡小体。MTT实验提示,热疗可明显抑制 MKN45细胞生长(P<0.01)。AO/EB荧光双染色显示,热疗后细胞呈淡黄或橘红色,胞核呈现致密斑状。热疗0.5 h、1 h、2 h和3 h 后,AO/EB荧光双染色法及Annex-in-V/PI双染色法流式检测细胞凋亡率基本一致。热疗0.5 h后细胞凋亡率明显增高,1 h略低于0.5 h,2 h达最高峰。West-ern blot显示,MKN45细胞各热疗时间的 PUMA 蛋白表达明显升高,热疗0.5 h 开始升高,热疗2 h 达最高峰,1 h 略低于0.5 h,3 h有所回落(P<0.05)。结论热疗2 h诱导胃癌细胞凋亡的效果最佳,并且可通过上调基因 PUMA 表达诱导胃癌MKN45凋亡
作者：刘星；肖凤；刘彬
来源：中国组织化学与细胞化学杂志 2015 年 2期
