目的分析肝激酶Bl (liver kinaseB1,LKBl)对人巨细胞肺癌(the people giant cell lung cancer,PGCL3)细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制.方法构建真核表达载体pCMV-LKB1,转染人巨细胞肺癌细胞.转染后48h,用免疫印迹法检测各组细胞LKB1蛋白表达水平,明确转染PGCL3效率.转染后每隔12h、连续72h检测LKB1对细胞增殖能力的影响;Transwell小室检测转染后各组细胞迁移、侵袭力.提取各组细胞蛋白检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平.结果pCMV-LKB1经PCR、双酶切及DNA测序鉴定后,证实目的基因片段插入方向正确,核酸序列与NCBI公布的LKB1的核酸序列一致;免疫印迹分析显示,转染pCMV-LKB1的PGCL3细胞中LKB1表达水平明显增高,表明pCMV-LKB1构建成功.增殖曲线分析和5-乙炔基-2'脱氧嘧啶核苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)检测显示,转染pCMV-LKB1能显著抑制PGCL3细胞的增殖;Transwell小室检测显示,过表达LKB1可显著抑制PGCL3细胞的迁移与侵袭;免疫印迹分析显示,过表达LKB1的PGCL3细胞其LKB1下游分子中总mTOR表达

作者：陈逸轩；刘燕；娄丽丽；时妍梅；陈文莉；陈新年

来源：中国组织化学与细胞化学杂志 2017 年 26卷 3期