目的 观察仅转染无启动子绿色荧光蛋白(GFP)的cDNA全长片段能否使整合有GFP基因的胰腺癌细胞内GFP表达降低.方法 用pEGFP-C1质粒转染人胰腺癌细胞株PANC-1,G418筛选及流式细胞术分选建立GFP蛋白高表达的稳定细胞株.用PCR方法从pEGFP-C1扩增出GFP基因全长cDNA并将其克隆至无启动子的复制型质粒PUC19,得到重组质粒即PUC-GFP.实验分为4组:空白对照组、空质粒组(PUC组)、GFP重组质粒干扰组(PUC-GFP组)、GFP小RNA干扰组(siGFP组).分别用稳定表达GFP和未经处理PANC-1细胞进行实验.用Western印迹、流式细胞术与倒置荧光显微镜检测重组质粒对细胞内稳定表达的GFP的影响及对GFP阴性细胞pEGFPC1质粒瞬时转染后绿色荧光表达强度的影响.结果 PUC-GFP可使稳定细胞株内的GFP表达下降,并且呈剂量依赖性.PUC-GFP组绿色荧光强度减弱程度和空白对照及空质粒组差异有统计学意义(P＜0.05)和siGFP组差异无统计学意义(P＞0.05).转染后第4天GFP表达降低并可持续至第6天,第4天后PUC-GFP组和siGFP组对GFP的抑制差异无统计学意义(P＞0.05).PUC-GFP与pEGFP-C1共转染GFP阴性PANC-1细胞株可使pEGPC1的瞬时转染效率降低.这两种情况下,荧光降低程度均和转染PUC-GFP的量呈正相关.结论 仅转染无启动子的某个特定基因的全长cDNA能使哺乳细胞
作者：任新瑜；梁智勇；师晓华；刘彤华
来源：中华病理学杂志 2007 年 36卷 8期
