目的 探讨小鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)实用可行的分离、培养及鉴定方法. 方法 改良密度梯度离心法分离出小鼠骨髓单核细胞,经差速贴壁法筛选后在内皮细胞生长培养基-2 MV培养液中培养,倒置显微镜下观察细胞形态,细胞计数试剂盒-8检测细胞增殖力,流式细胞技术鉴定细胞表面标志,管腔形成实验检测其成管腔能力,荧光显微镜检测吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-AC-LDL)及异硫氰酸荧光素-荆豆凝集素-1(FITC-UEA-1)及功能. 结果 初期细胞呈圆形;培养4d细胞后开始转变为短梭形;培养7d呈现集落样生长,数量逐渐增多;培养14d后细胞呈短梭、三角等不同形态;培养21d细胞呈现典型“铺路石”样改变.流式细胞技术检测出:CD34+细胞占84.3％,VEGFR2+细胞占74.1％,而CD45+细胞只占到4.04％,该细胞能在Matrigel基质胶上形成管腔样结构,并具有吞噬DiI-AC-LDL及结合FITC-UEA-1功能. 结论 通过对前人经验的改良及反复探索,寻找到了一套小鼠骨髓EPCs分离、培养、鉴定的可靠方法,此方法所获得的EPCs增殖能力良好,数量多,生物学特性稳定,可为相关后续研究提供理想的种子细胞.
作者：罗伟；李翔翮；杨先腾；李森磊；王远政；张一；田晓滨；孙立
来源：中华创伤骨科杂志 2018 年 20卷 6期
