目的：利用超声靶向微泡破坏(UTMD)技术联合经典核定位信号肽(cNLS)促进目的基因入核,提高转染效率。方法用不同的方式将增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)转入293T 细胞。实验分4组：UTMD+pEGFP (对照组),UTMD+pEGFP+cNLS (经典型组),UTMD+pEGFP+mNLS (突变型组)和 UTMD+pEGFP+cNLS+WGA (入核阻滞组)。NLS 和 pEGFP 分别用 FITC 和Cy3标记。转染6 h 后,流式细胞仪检测 Cy3阳性细胞百分比作为质粒入胞率,激光共聚焦显微镜观测细胞核中 Cy3荧光强度占整个细胞荧光强度百分比作为质粒的入核率。转染48 h 后,用流式细胞仪检测转染效率,CCK8检测细胞存活率,RT-PCR 和 Western blot 分别检测 mRNA 和蛋白的相对表达量,并比较上述指标在4组间的差异以评价 cNLS 在 UTMD 介导基因转染中的作用。结果①转染6 h 后,带绿色荧光标记的 NLS 在细胞内不同部位显示,经典型组大量入核,突变组细胞质和细胞核均可显示,入核阻滞组主要聚集在细胞质,未能入核；②转染6 h 后,4组质粒的入胞率分别为(61±11)
作者：曹省；周青；王益佳；姜楠；胡波；郭瑞强
来源：中华超声影像学杂志 2016 年 25卷 9期
