目的构建表达人Bcl-2基因的重组腺病毒,并研究其在原代培养螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGC)的表达特性.方法采用细菌内同源重组法,从pUC-CAGGS/Bcl-2质粒中获得人Bcl-2 cDNA,克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,后者和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌内同源重组,在HEK293细胞中包装成为重组Ad增强型绿色荧光蛋白/Bcl-2腺病毒,电镜观察病毒颗粒,用病毒感染原代培养的大鼠螺旋神经节细胞,在荧光显微镜下观察感染效率,用逆转录聚合酶链反应方法检测Bcl-2基因在螺旋神经节细胞的转录表达,用Western Blot检测其蛋白的表达.结果经酶切鉴定证实重组腺病毒质粒构建成功,电镜显示包装细胞中有大量病毒颗粒存在,呈规则六边形.荧光显微镜下观测到感染病毒的SGC细胞发出明亮的绿色荧光.分别在mRNA水平及蛋白水平证实有外源性Bcl-2 基因的表达.结论细菌内同源重组法是一种简便、高效的制备方法.构建的重组Ad增强型绿色荧光蛋白/Bcl-2腺病毒能有效的感染SGC,并可在SGC中正确地转录和翻译,为进一步研究腺病毒介导的Bcl-2基因对螺旋神经节损伤的保护作用奠定基础.
作者：罗凌惠；龚树生；宋鹏；鄢开胜；刘英鹏
来源：中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2005 年 40卷 7期
