目的 构建组织蛋白酶L(CTSL)基因的真核表达质粒,通过体外实验研究CTSL基因与卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞侵袭、转移的关系.方法 采用逆转录(RT)-PCR技术从卵巢癌组织总RNA中扩增CTSL基因的cDNA全长,克隆至pMD18-T载体上;酶切、纯化CTSL基因后与pcDNA3.1载体连接,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-CTSL.应用脂质体介导的基因转染技术将重组质粒转染卵巢癌HO8910细胞,RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检验CTSL mRNA和蛋白的表达情况,细胞增殖能力测定分别采用四甲基偶氮唑蓝法和集落形成实验,细胞周期检测、细胞体外侵袭、转移、黏附能力测定分别采用流式细胞仪、细胞体外侵袭重建基底膜实验、穿膜小室(transwell小室)实验、体外黏附实验.结果 RT-PCR和蛋白印迹法结果证实,HO8910细胞转染pcDNA3.1-CTSL质粒后有CTSL基因和蛋白的表达.HO8910-CTSL细胞的生长速度加快,但与对照的HO8910-pcDNA3.1及HO8910细胞分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).HO8910-CTSL细胞的S+G2+M期细胞比例为37.9
作者：王素梅；李力；张玮；黎丹戎；唐步坚
来源：中华妇产科杂志 2010 年 45卷 8期
