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目的 观察BTB-cap’n'collar(CNC)同源异构体1(Bachl)-siRNA腺病毒载体对TGF-β1诱导后的小鼠肺成纤维细胞(MLF)中抗氧化因子及纤维化相关细胞因子表达的影响.方法 构建Bach1 siRNA腺病毒载体及空病毒载体,5 ng/ml TGF-β1处理MLF 24 h,分别感染空病毒载体及Bach1 siRNA腺病毒载体.RT-PCR及蛋白印迹法分别检测细胞中Bach1、血红素加氧酶1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化酶1 (GPx1)及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化还原酶1(NQO1)的mRNA和蛋白表达水平;ELISA检测细胞上清液中纤维化相关因子TGF-β1及IL-6的水平.多个组间的比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD检验.结果 TGF-β1诱导后MLF中Bach1 mRNA水平(2.127±0.089)和蛋白表达较空白对照组mRNA(1.000±0.067,t=-21.77,P<0.01)及蛋白表达明显升高,细胞上清中纤维化相关因子TGF-β1 (52±6)及IL-6 (34±6)较空白对照组(26±4,t=-11.11,P<0.01及20±5,t=-5.32,P<0.01)的表达也明显升高;但抗氧化因子HO-1及GPx1的mRNA水平(0.403±0.040及0.567±0.112)和蛋白表达较对照组mRNA(1.000±0.181,t=25.57,P<0.01及1.000±0.212,t=6.68,P<0.05)和蛋白表达明显减低;Bach1 siRNA处理后,MLF中Bach1 mRNA水平(0.153±0.015)和蛋白表达较TGF-β1组及空载体组的mRN

作者:刘媛;郑毅

来源:中华风湿病学杂志 2017 年 21卷 4期

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作者:
刘媛;郑毅
来源:
中华风湿病学杂志 2017 年 21卷 4期
标签:
Bach1 小鼠 肺 成纤维细胞 氧化性应激 BTB and cap'n'collar protein homology 1 Mice Lung Fibroblasts Oxidative stress
目的 观察BTB-cap’n'collar(CNC)同源异构体1(Bachl)-siRNA腺病毒载体对TGF-β1诱导后的小鼠肺成纤维细胞(MLF)中抗氧化因子及纤维化相关细胞因子表达的影响.方法 构建Bach1 siRNA腺病毒载体及空病毒载体,5 ng/ml TGF-β1处理MLF 24 h,分别感染空病毒载体及Bach1 siRNA腺病毒载体.RT-PCR及蛋白印迹法分别检测细胞中Bach1、血红素加氧酶1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化酶1 (GPx1)及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化还原酶1(NQO1)的mRNA和蛋白表达水平;ELISA检测细胞上清液中纤维化相关因子TGF-β1及IL-6的水平.多个组间的比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD检验.结果 TGF-β1诱导后MLF中Bach1 mRNA水平(2.127±0.089)和蛋白表达较空白对照组mRNA(1.000±0.067,t=-21.77,P<0.01)及蛋白表达明显升高,细胞上清中纤维化相关因子TGF-β1 (52±6)及IL-6 (34±6)较空白对照组(26±4,t=-11.11,P<0.01及20±5,t=-5.32,P<0.01)的表达也明显升高;但抗氧化因子HO-1及GPx1的mRNA水平(0.403±0.040及0.567±0.112)和蛋白表达较对照组mRNA(1.000±0.181,t=25.57,P<0.01及1.000±0.212,t=6.68,P<0.05)和蛋白表达明显减低;Bach1 siRNA处理后,MLF中Bach1 mRNA水平(0.153±0.015)和蛋白表达较TGF-β1组及空载体组的mRN