目的 探讨X射线照射联合RNA干扰STA33基因对人食管癌细胞放射敏感性的影响.方法 针对STA33 mRNA序列,设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板寡核苷酸链(siRNA1、siRNA2和siRNA3),构建STA33-siRNA阳性和阴性重组质粒.用以转染Eca-109细胞.Eca-109细胞分为5组:转染试剂对照组、阴性质粒对照组、重组质粒siRNA1实验组、siRNA2实验组和siRNA3实验组.细胞转染后48 h.换用G418培养液筛选21 d,获得单个阳性克隆并扩增.分别用RT-PCR和Western blotting检测细胞中的STAT3 mRNA和蛋白表达.转染细胞分别接受0、2、4、6和8 Gy X射线照射,平板克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞仪检测经4 Gy X射线照射的细胞周期和凋亡.结果 成功构建了STAT3-siRNA3重组质粒.RT-PCR和Western blotting显示,siRNA3实验组的STA33 mRNA和蛋白表达显著少于2个对照组,而siRNA1和siRNA2实验组的STA33 mRNA和蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义.在2～8 Gy剂量点,siRNA3实验组细胞存活分数均显著低于对照组(t=-0.228～-0.051,P<0.05).流式细胞仪分析显示,经4 Gy X射线照射,siRNA3实验组G0/G1,期细胞的百分率和细胞凋亡率均显著高于转染试剂对照组、阴性质粒对照组(t=-13.137～16.350,P<0.01),4 Gy X射线照射可引起细胞周期G0/G1期

作者：赵环宇；张维铭；陈锦飞

来源：中华放射医学与防护杂志 2011 年 31卷 2期