目的 探讨asporin在椎间盘基质合成和分泌中的分子调控机理,明确其在椎间盘退行性病变中的作用.方法 取因严重椎间盘突出症(有典型临床症状、体征及Pfirrmann'sⅢ级以上)入院行椎间融合术患者的椎间盘组织标本共8例,其中男6例,女2例,年龄11～28岁,平均(20.25±3.37)岁.利用酶消化法提取椎间盘组织中的原代细胞,在藻酸盐珠中悬浮培养2周后播种于培养皿中.细胞予以不同浓度TGF-β1刺激6、12、18和24h,提取细胞RNA后行实时荧光定量PCR,检测asporin的mRNA表达;细胞经siRNA沉默内源性asporin表达后,以TGF-β1刺激细胞24 h,提取细胞RNA行实时荧光定量PCR,检测asporin、Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的mRNA表达;细胞经特异性p38抑制剂或ERK抑制剂处理12h后,以TGF-β1刺激细胞24 h,提取细胞蛋白质后行蛋白印迹实验,检测asporin蛋白水平.结果 在原代椎间盘细胞实验中,TGF-β1诱导下asporin表达水平显著增高,TGF-β1呈现剂量与时间正依赖关系,刺激24 h后不同浓度(5,10,15 ng/ml)之间有显著差异,分别为2.754±0.24、3.651±0.319和4.583±0.38 (F=24.782,P=0.001).经敲除内源性asporin表达后,TGF-β1诱导合成的基质蛋白,即蛋白聚糖(t=7.387,P=0.002)和Ⅱ型胶原蛋白(t=4.443,P=0.0 11)显著增加.利用特异性p38抑制剂阻断p38

作者：吴成爱；江晓舟；郑山；王娜；王莹；姜旭；田伟

来源：中华骨科杂志 2017 年 37卷 14期