目的 研究Notch信号通路维持骨肉瘤干细胞样特性的作用及其机制.方法 体外细胞实验中,取对数生长期的人骨肉瘤细胞MG63细胞系,利用慢病毒技术转导NICD1、Numb-shRNA上调Notch信号通路活性,通过肿瘤成球实验,流式细胞术检测细胞表面标记物Stro-1、CD117,Western blot和qRT-PCR检测干细胞相关基因Sox2和Oct4,观察Notch信号通路对骨肉瘤干细胞样特性的影响.在动物实验中,根据注射成瘤细胞不同,将裸鼠随机分NICD1过表达组、DAPT抑制剂组和对照组.连续观察8周,通过记录每周肿瘤的体积和重量,比较各组成瘤后体积重量变化,观察Notch信号通路对动物成瘤的影响.进一步探索Notch信号通路调控Eph信号通路的体外细胞实验中,利用Western blot检测Eph通路相关蛋白EphB,p-EphB评价Notch信号通路对于Eph通路的调控作用.在体外实验MG63骨肉瘤细胞培养基中添加具有活性的ephrinB1后,利用Western blot、肿瘤成球率、Sox2、Oct4表达量变化,观察Eph通路激活后对肿瘤细胞干性的影响.结果 体外细胞实验中NICD1、Numb-shRNA成功上调Notch信号通路活性,Notch信号通路激活的骨肉瘤体外肿瘤成球率上调、流式细胞检测Stro-1/CD117双阳性比率增高,干细胞相关基因Sox2、Oct4表达量上调.动物实验发现Notch信号通路激活可促进体内成瘤,而
作者:高天;方志伟;余铃;陈敬腾;刘佳勇;李舒;白楚杰;薛瑞峰;张路;郭卫春;樊征夫
来源:中华骨科杂志 2018 年 38卷 10期