目的 用携带HCV复制子的Huh-7.5细胞探讨HCV复制对沉默信息调节因子1(SIRT1)表达及肝细胞脂类代谢的影响.方法 实验分为Huh-7.5细胞、复制子细胞和干扰素处理的复制子细胞3组.应用流式细胞仪、比色法测定细胞活性氧(ROS)变化和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)+/NADH比值变化.应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR (RT-PCR)、Western blot检测SIRT1活性、mRNA及蛋白的表达.RT-PCR检测SIRT1下游调节脂类代谢基因的mRNA水平.试剂盒检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)的含量,液体闪烁计数仪检测脂肪酸β氧化速度,Westem blot检测HCV非结构蛋白5A表达水平.计量资料两组间比较用t检验,三组间比较用单因素方差分析.结果 与Huh-7.5细胞相比,复制子细胞ROS水平增加(3.8±0.5与1.0±0.2,t=12.736,P＜0.01),NAD+/NADH比值下降(0.03±0.01与0.12±0.03,t=6.971,P＜0.01).与Huh-7.5细胞和IFN处理的复制子细胞相比,复制子细胞SIRT1的活性下降(0.3±0.1与1.0±0.2、0.9±0.2,F=6.766,P＜0.01)、mRNA水平下降(0.4±0.1与1.0±0.3、0.9±0.2,F=5.864,P＜ 0.01)和蛋白水平下降(0.3±0.1与0.8±0.2、0.9±0.2,F=5.419,P＜0.01);叉头蛋白转录因子(FoxO1)磷酸化水平下降(0.2±0.1与0.5±0.1、0.6±0.2,F=4.534,P＜ 0.05),固醇调节元件

作者：孙丽杰；赵勇华；李树臣；于建武；康鹏；刘伟

来源：中华肝脏病杂志 2013 年 21卷 11期