目的 建立一种稳定的成人肝细胞冷冻方法,为构建永生化肝细胞系提供充足的肝细胞来源,为肝细胞移植、生物人工肝支持系统治疗急、慢性肝病及肝细胞体外应用模型提供潜在的肝细胞资源.方法 20例供肝采用离体两步胶原酶灌注技术分离成人原代肝细胞.选择7个预置时间点(2、6、12、24、36、48、72 h),在4℃人无血清培养基预置12 ～ 24 h后,使用海藻酸钠-多聚赖氨酸微球微囊化肝细胞,液氮保存.分析预置微囊冷冻组及对照组肝细胞的形态学、病理结构、白蛋白水平、尿素合成、细胞周期、肝细胞特异性功能基因mRNA和蛋白表达水平.各组间数据比较均采用方差分析,计数资料采用Fisher 's exact test检验.结果 在部分肝叶切除后使用离体两步胶原酶灌流技术分离所得肝细胞活率和贴壁率分别是75.0％±4.6％和72.0％±6.0％.4℃预置12h或24h细胞的白蛋白分泌高于其他时间点,F=40.3,P值均＜0.05,差异有统计学意义.4℃预置12h或24h与立即冷冻(IC)组比较,解冻后贴壁肝细胞白蛋白和尿素合成水平明显增高,且肝细胞特异性功能基因mRNA和蛋白水平明显增高,此两个时间点是最适预置时间.预置微囊冷冻(PMC)组细胞与IC组比较,肝细胞形态保持的更为完整,细胞增殖周期、糖原染色及肝细胞功能特异性基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增强.P
作者：杭化莲；禹亚彬；卞建民；夏强
来源：中华肝脏病杂志 2014 年 22卷 9期
