目的 构建一种双报告基因系统,用于筛选和评价抑制Ⅰ型胶原α1链基因(COL1A1)表达的抗肝纤维化药物. 方法 RT-PCR克隆转化生长因子β1(TGFβ1)全长基因,酶切后插入载体pcDNA3.1和pJW4303,构建真核表达载体pcDNA3.1-TGFβ1和pJW4303-TGFβ1;以基因组DNA为模板,克隆COL1A1启动子,插入报告基因载体pGL4.29,构建含COL1A1启动子的报告基因载体pGL4.29-COL1A1 promoter.上述重组载体鉴定使用酶切和序列测定.将pcDNA3.1-TGFβ1或pJW4303-TGFβ1与pGL4-COL1A1 promoter、内参报告基因载体pRL-null共转染入肝星形细胞系LX-2中,构建转录激活的双报告基因系统.使用地塞米松鉴定该双报告基因系统评价抗肝纤维化药物的有效性.组间比较用Studant t检验分析,P＜0.05为差异有统计学意义. 结果 成功构建TGFβ1的两种真核表达载体和含COL1A1启动子的报告基因载体.通过双报告基因检测两种方式表达TGFβ1对COL1A1启动子活性的影响,结果表明:分泌表达的TGFβ1使COL1A1启动子活性提高200倍以上(t=21.78,P=0.0001),非分泌表达的TGFβ1仅使COL1A1启动子活性提高了不到2倍(t=3.396,P=0.0274).成功构建了转录激活的双报告基因系统.用COL1A1表达抑制剂地塞米松作为模式药物来鉴定该系统的有效性,结果显示地塞米松对COL1A1启动子有抑

作者：张伟；代晓朋；于虹；王鲁燕；孙世惠；李军锋；周育森

来源：中华肝脏病杂志 2014 年 22卷 10期