目的 观察上皮细胞黏附分子(EPCAM)阳性的正常成体小鼠肝祖细胞转化为多项分化潜能的肝干细胞,并探讨HBx蛋白对肝干细胞的影响.方法 改良型两步灌流法消化肝组织,差异性离心法联合密度梯度离心法筛选肝祖细胞;在表皮生长因子和胶原蛋白作用下,观察肝祖细胞向肝干细胞转化,并经细胞免疫荧光法鉴定干细胞中CD133、 EPCAM、 CD49f及细胞角蛋白19表面标志物的表达情况.添加二甲基亚砜,过碘酸雪夫氏染色、细胞免疫荧光、流式细胞术检测干细胞向肝细胞和胆管上皮细胞分化情况.转染HBx蛋白后,PCR检测细胞转染效率,并观察HBx转染后干细胞形态学差异性及其增殖能力.两组间数据比较采用t检验. 结果 肝祖细胞存活率为78.67％±4.04％,在表皮生长因子和胶原蛋白作用下,铺路石样贴壁生长的肝祖细胞中部分细胞聚集成细胞球,具有干细胞样性质,高表达CD133、 CD49f、细胞角蛋白19,低表达EPCAM.在二甲基亚砜作用下,能够向肝细胞和胆管上皮细胞分化.HBx转染后肝干细胞能维持干细胞形态,克隆能力增强. 结论 EPCAM阳性的正常成体小鼠肝祖细胞能够向肝干细胞转化,同时HBx蛋白对维持肝干细胞的稳定性、促进增殖有重要作用.
作者：于黎明；罗娜；李青岭；陈姝；何松
来源：中华肝脏病杂志 2015 年 23卷 11期
