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目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体α (PPARα)抗炎作用的细胞与分子机制.方法 第一部分将小鼠骨髓来源的原代巨噬细胞(BMDMs)按随机数字表法随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、PPARα的选择性激动剂WY14643 10 μ mol/L组、WY14643 25 μmol/L组、WY14643 50 μmol/L组;第二部分将BMDMs按随机数字表法随机分为LPS组、WY14643+ LPS组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+WY14643+ LPS组.通过LPS (20 ng/ml)刺激BMDMs构建细胞炎症模型,WY14643作为PPAR α的选择性激动剂于造模前2h分别按10μmol/L、25 μ mol/L、50μmol/L给药(第二部分研究以50 μ mol/L给药),3-MA作为自噬抑制剂于造模前2h以10 mmol/L给药,对照组给予等量的二甲基亚砜,绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3质粒于造模前24h转染细胞,于LPS刺激后6h收取细胞行相关的检测.荧光显微镜下通过检测绿色荧光蛋白的多少来评价自噬活性的高低;实时定量PCR检测促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-1 β、IL-6以及趋化因子(CXCL)-1、CXCL-10的mRNA表达;蛋白质印迹法检测PPAR α,自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3 (LC3)、自噬相关基因(ATG)-5、ATG-7、溶酶体相关膜蛋白-1的表达.组间差异采用单因素方差分析,各组之间差异的两两比较用LSD-t检验. 结果 在体

作者:焦明静;周莉;任锋;王亚东;申川;段钟平;赵彩彦

来源:中华肝脏病杂志 2016 年 24卷 12期

知识库介绍

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作者:
焦明静;周莉;任锋;王亚东;申川;段钟平;赵彩彦
来源:
中华肝脏病杂志 2016 年 24卷 12期
标签:
过氧化物酶体增殖物激活受体 自噬 炎症 Peroxisome proliferator-activated receptors Autophagy Inflammation
目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体α (PPARα)抗炎作用的细胞与分子机制.方法 第一部分将小鼠骨髓来源的原代巨噬细胞(BMDMs)按随机数字表法随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、PPARα的选择性激动剂WY14643 10 μ mol/L组、WY14643 25 μmol/L组、WY14643 50 μmol/L组;第二部分将BMDMs按随机数字表法随机分为LPS组、WY14643+ LPS组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+WY14643+ LPS组.通过LPS (20 ng/ml)刺激BMDMs构建细胞炎症模型,WY14643作为PPAR α的选择性激动剂于造模前2h分别按10μmol/L、25 μ mol/L、50μmol/L给药(第二部分研究以50 μ mol/L给药),3-MA作为自噬抑制剂于造模前2h以10 mmol/L给药,对照组给予等量的二甲基亚砜,绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3质粒于造模前24h转染细胞,于LPS刺激后6h收取细胞行相关的检测.荧光显微镜下通过检测绿色荧光蛋白的多少来评价自噬活性的高低;实时定量PCR检测促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-1 β、IL-6以及趋化因子(CXCL)-1、CXCL-10的mRNA表达;蛋白质印迹法检测PPAR α,自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3 (LC3)、自噬相关基因(ATG)-5、ATG-7、溶酶体相关膜蛋白-1的表达.组间差异采用单因素方差分析,各组之间差异的两两比较用LSD-t检验. 结果 在体