目的 筛选并合成CIT基因的最佳siRNA干扰序列,并检测其对人肝癌细胞株SK-Hep-1中CIT基因表达的干扰效率及其对SK-Hep-1人肝癌细胞增殖的影响.方法 根据CIT基因序列设计并合成3个siRNA靶点,通过脂质体转染法转染入SK-Hep-1人肝癌细胞,用Real-time PCR和蛋白质印迹法检测其对目的基因CIT的敲减效率.采用细胞免疫化学、共聚焦显微镜观察siRNA干扰后48h,SK-Hep-1细胞中CIT表达的变化情况.用EdU细胞增殖实验检测siRNA干扰后48h对SK-Hep-1细胞增殖的影响.两样本均数间比较采用t检验,多样本均数间比较采用单因素方差分析.结果 3条针对不同靶点的干扰序列,蛋白质印迹法检测结果显示,相较于对照组,敲低1、2、3组CIT蛋白的表达水平均降低(P<0.01),而敲低1组蛋白表达量最低.Real-time PCR检测结果显示,相较于对照组,敲低1、2、3组CIT mRNA表达水平均降低(P<0.01),而敲低1组mRNA表达量最低.激光共聚焦显微镜从形态学上也证实转染siRNA之后,CIT的表达明显减弱.EdU增殖实验结果显示,转染CIT的siRNA将明显减弱SK-Hep-1肝癌细胞的增殖(P<0.05).结论 成功筛选并合成能有效抑制SK-Hep-1肝癌细胞中CIT基因表达的siRNA片段,且能明显抑制SK-Hep-1细胞的增殖.
作者：胡月；刘杞；周晓芳；黄丽利；孙航
来源：中华肝脏病杂志 2019 年 27卷 4期
