目的:探讨siRNA沉默多药耐药相关蛋白(MRP)5基因对人肝癌耐药细胞多药耐药性的影响。方法构建人肝癌耐药细胞HepG2/表柔比星(ADM),合成MRP5-siRNA片段,使用Lipofectamine 2000脂质体转染细胞。实验分3组,siRNA组为HepG2/ADM转染MRP5-siRNA,耐药组为HepG2/ADM细胞,普通组为肝癌细胞HepG2。MTT法检测细胞对化疗药物的敏感性,实时荧光定量RT-PCR检测MRP5基因mRNA相对表达量,Western blot法检测MRP5蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况。多组比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD-t检验或t检验。结果 siRNA组细胞对ADM、氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OXA)的半抑制浓度(IC50)分别为(0.180±0.008)、(1.657±0.014)、(0.055±0.007)mg/L,耐药组相应为(0.317±0.035)、(3.785±0.523)、(0.129±0.009)mg/L,普通组相应为(0.022±0.008)、(0.163±0.010)、(0.080±0.012)mg/L,耐药组对3种化疗药物的IC50明显高于普通组(t=14.202,11.993,13.937;P<0.05),siRNA组明显低于耐药组(LSD-t=-6.609,-7.044,-11.257;P<0.05)。siRNA组、耐药组、普通组细胞的MRP5 mRNA相对表达量分别为1.377±0.141、3.858±0.481、1.000±0.374,耐药组较普通组明显升高(LSD-t=9.6
作者:杨尚霖;刘建平;刘波;苏正;韦金星;张克韬
来源:中华肝脏外科手术学电子杂志 2016 年 5卷 2期