目的构建E.coli.-BCG(Bacille Calmette-Guerin)穿梭载体,在母牛分枝杆菌细胞壁融合表达结核分枝杆菌(MTB)的分泌蛋白Ag85B-ESAT-6.方法用聚合酶链反应(PCR)从MTB毒株H37Rv基因中扩增出结核分枝杆菌19 000抗原(19-ss)胞壁区及其上游调控元件基因,克隆入E.coli.-BCG穿梭载体pOLYG中,构建表达蛋白能嵌入细胞壁中的E.coli.-BCG穿梭载体.用间接免疫荧光染色法观察该载体携带所构建的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B和ESAT-6基因在母牛分枝杆菌宿主中的融合表达.结果经测序证实所克隆的19-ss基因序列正确,所构建的E.coli.-BCG穿梭载体(pCW)能完成在大肠杆菌和母牛分枝杆菌细胞之间的穿梭,经免疫荧光检查外源基因Ag85B-ESAT-6可融合表达于分枝杆菌宿主表面.结论本方法可成功构建能够在分枝杆菌胞壁融合表达MTB分泌蛋白Ag85B-ESAT-6的E.coli.-BCG穿梭质粒.
作者：师长宏；范雄林；史皆然；徐志凯；李元；柏银兰；薛莹
来源：中华结核和呼吸杂志 2004 年 27卷 4期
