目的探讨聚合酶链反应-单链构象多态性分析 (PCR-SSCP)并Southern杂交检测耐氧氟沙星(OFLX)结核分枝杆菌的可行性,并探索结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药的界限.方法(1)体外筛选人工诱变的耐OFLX的耐药突变株,并检测OFLX对这些耐药株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC).(2)扩增结核分枝杆菌的gyrA基因,包括H37Rv 1株、H37Ra 1株、临床分离的OFLX敏感株10株及人工诱变的耐OFLX H37Rv(17株)、H37Ra(17株)及临床分离菌株(51株)共计85株,并对此扩增产物进行SSCP分析及Southern 杂交,对比观察耐OFLX结核分枝杆菌的核酸单链条带位移的变化.为了验证PCR-SSCP并Southern杂交结果的可重复性,对36株临床分离的耐OFLX菌株的耐药界限进行初步检测.结果经PCR-SSCP及Southern 杂交,85株人工诱变的耐OFLX菌株,全部检测到gyrA基因突变.在OFLX 10 μg/ml这一点上,明显地存在着一个结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药并存的交叉区.对36株临床分离的OFLX耐药菌的PCR-SSCP合并Southern 杂交检测结果显示,对比标准株H37Ra,在临床分离的耐OFLX菌株间观察到了类似的因单链构象变化而引起的单链位移的结果.结论 PCR-SSCP合并Southern 杂交可以清晰地区分对OFLX敏感与耐药的菌株,以10 μg/ml为界作为判别结核分枝杆菌对OFLX是否已经

作者：张健源；王甦民；李传友；田苗；张旭霞；赵冰；李卫民；赵雁林；邱云青；马玙

来源：中华结核和呼吸杂志 2005 年 28卷 12期