目的 研究提纯并鉴定牙龈卟啉单胞菌(P.g)W83 牙龈蛋白酶的方法,探讨牙龈蛋白酶对人成骨细胞系hFOB 增殖及凋亡的影响.方法 丙酮沉淀P.g W83 上清,经重悬、透析、超滤提取牙龈蛋白酶;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)分离牙龈蛋白酶条带;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱/源后衰变法(MALDI-TOF-MS/MS+MS)鉴定牙龈蛋白酶提取物;底物发色法测定牙龈蛋白酶活性;牙龈蛋白酶与人成骨细胞系hFOB 1.19共培养,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)或CCK-8 检测细胞凋亡或增殖.结果 P.g W83 牙龈蛋白酶提取物经SDS-PAGE 分离出50 kDa 蛋白条带,MALDI-TOF-MS/MS+MS 鉴定其为精氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Rgps).底物发色法测定Rgps、赖氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Kgp)活性分别为75.62、10.51 U/L,5 mmol/L 半胱氨酸蛋白酶抑制剂TLCK 对Rgps、Kgp 活性抑制分别为99.51
作者：宋祥晨；张福萍；李希庭；梁敏
来源：中华口腔医学研究杂志（电子版） 2013 年 7卷 4期
