目的：利用慢病毒载体持续表达RNA干扰序列抑制基因表达，建立SSA/Ro52稳定基因沉默细胞系，为进一步研究SSA/Ro52的功能提供有效工具。方法4条SSA/Ro52特异序列（克隆1为TGGCATGGTCTCCTTCTACAA，克隆2为CTGCCTTCTTTATGGGACTTA，克隆9为TGAGAAGTTGGAAGTGGAAAT，克隆11为AGTTATCCTATGGTCCTGGGT）和无关对照序列克隆至慢病毒载体pLKO-puro，表达后可形成小发卡结RNA（small hair-pin，shRNA），通过RNA干扰机制抑制特异基因表达。表达SSA/Ro52特异序列的克隆1、2、9、11以及表达无关序列的对照克隆（scramble，S）分别与包装载体pGag-Pol和pVSV-G共同转染293T细胞，收集含病毒颗粒的培养液。用表达SSA/Ro52特异序列和无关对照序列的病毒颗粒感染Hela细胞，抗生素筛选，建立稳定细胞系。以GAPDH为内对照定量实时PCR检测SSA/Ro52 mRNA的表达。免疫印记检测SSA/Ro52蛋白，扫描SSA/Ro52条带与β-actin条带相比为SSA/Ro52蛋白的相对表达水平。克隆1、2、9、11转染细胞中SSA/Ro52的表达水平与对照克隆S的比值为基因表达的抑制程度。结果慢病毒颗粒可以有效感染Hela细胞，含shRNA表达框架的病毒序列可以整合至细胞基因组，形成稳定细胞系。克隆1、2、9、11转染细胞在抗生素筛选3 d后，其SSA/Ro52 mRNA表达水平分别

作者：郭娟；周炜

来源：中华临床免疫和变态反应杂志 2014 年 3期