目的:研究自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)对人肝癌细胞的特异性杀伤作用,推进该自杀基因治疗原发性肝癌的可行性,从而为肝癌靶向基因治疗奠定一定的基础。方法将pcDNA3.1-pSurvivin-TK质粒转染人肝癌细胞HepG2中,RT-PCR法检测自杀基因mRNA水平,Western blot法检测自杀基因蛋白量的表达;再次转染上述质粒到肝癌细胞HepG2中,随着更昔洛韦(GCV)剂量的增加,来监测 pcDNA3.1-pSurvivin-TK 重组载体对细胞的杀伤效果,CCK-8法检测 GCV 对肝癌细胞的毒性作用,流式细胞术检测细胞凋亡的情况。结果通过 RT-PCR 法、Western blot法表明了转染该重组质粒的HepG2细胞可以成功表达TK基因;此外,在外源药物GCV作用下也实现了对肝癌细胞的特异杀伤,CCK-8法表明,随着药物浓度的增高质粒转染组细胞存活率逐渐下降;流式细胞术检测得知,细胞经GCV处理48 h后,转染pcDNA3.1-pSurvivin-TK重组质粒的肝癌细胞组凋亡率约为(37.37±4.02)
作者:李勇芳;张英敏;赵娜;孟凡秀;张琪;高然朋;张悦红;于保锋;郭睿;王海龙;解军;徐钧
来源:中华临床医师杂志(电子版) 2016 年 2期