目的：构建靶向CD74基因的小发夹RNA慢病毒载体，感染胰腺癌Capan-2细胞株，筛选并建立稳定细胞株。方法应用qRT-PCR法检测不同胰腺癌细胞株间CD74的mRNA表达情况；根据GeneBank提供的CD74 cDNA序列，设计3条靶向CD74的siRNA序列，构建重组干扰质粒pSUPERretro-puro-CD74-siRNA；将重组干扰质粒转染Capan-2细胞，经过qRT-PCR和Western blot法筛选出最佳干扰效果质粒；慢病毒包装质粒并感染Capan-2细胞株，利用嘌呤霉素筛选，建立稳定低表达CD74细胞株；应用qRT-PCR和Western blot法检测CD74基因mRNA和蛋白的表达抑制率。结果Capan-2细胞株的CD74 mRNA平均ΔCt值为102.9±6.4，在各胰腺癌细胞株中表达水平最高（P＜0.05）；携带干扰效果最高siRNA的慢病毒感染Capan-2细胞，建立了稳定低表达CD74基因的Capan-2细胞株，CD74基因mRNA抑制率61
作者：黄耀星；贾林；周荣佳；王康玮；余丹纯；孙小娟
来源：中华临床医师杂志（电子版） 2016 年 10卷 13期
