目的:筛选能够显著抑制自发性高血压大鼠(SHR)阴茎海绵体平滑肌细胞内ROCK2基因表达的携带ROCK2基因siRNA的慢病毒载体. 方法:设计并合成4个靶向ROCK2的siRNA片段,构建并包装成慢病毒载体.随机将5只SHR阴茎海绵体平滑肌细胞分为6组,每组每个样本3×104个细胞,每组5个样本,分别为:A组(未转染对照组)、B组(携带慢病毒转染组)、C～F组(分别携带靶向ROCK2基因siRNA 1～4号靶点的慢病毒转染组),以感染复(MOI)=80转染SHR阴茎海绵体平滑肌细胞,转染后48 h荧光显微镜下观察细胞GFP表达情况,并用RT-PCR检测各组被转染细胞ROCK2mRNA的表达. 结果:荧光显微镜下观察各组细胞转染效率均＞50％.与A组相比,B组ROCK2mRNA的表达无明显改变(P＞0.05);C、D、F组SHR阴茎海绵体平滑肌细胞ROCK2基因mRNA的表达较A组极显著下降(P＜0.01),抑制效率分别达到(43.91 ±8.19)％、(47.15±6.64)％、(25.7±6.03)％;E组SHR阴茎海绵体平滑肌细胞ROCK2基因mRNA的表达较A组显著下降(P＜0.05),抑制效率为(16.81 ±5.94)％. 结论:本研究构建的4种携带ROCK2基因的siRNA慢病毒载体均能够显著抑制SHR阴茎海绵体平滑肌细胞内ROCK2基因的表达,其中有1种慢病毒载体抑制作用最强.
作者：彭强；马福年；姜睿；陈枫
来源：中华男科学杂志 2014 年 20卷 5期
