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目的:探讨尿源干细胞来源的外泌体(USC-Exo)对糖尿病性勃起功能障碍(DED)大鼠海绵窦内皮功能和勃起功能的改善作用,并探讨其作用机制.方法:通过超速离心法从USC的培养基中提取USC-Exo,并进行鉴定.将SD大鼠海绵窦内皮细胞(CCEC)分为4组:(1)正常组;(2)高糖组;(3)Exo组:高糖培养基中加入USC-Exo(10 μg/ml);(4)3-MA 组:高糖培养基中加入 USC-Exo(10 μg/ml)和 3-MA(2 mmol/L).将 mRFP-GFP-LC3腺病毒转染CCEC后在荧光显微镜下检测细胞内自噬流的改变;通过CCK8实验检测细胞增殖能力的改变,通过Matrigel实验检测CCEC的成管能力.通过腹腔注射链脲佐菌素及阿扑吗啡实验筛选出DED大鼠,将其随机平均分为2组(n=5只/组):DED组和Exo组,另取5只同龄正常雄性大鼠作为正常组,其中正常组和DED组予阴茎海绵窦注射100μl PBS,Exo组予阴茎海绵体注射USC-Exo 100μl(浓度为1 μg/μl).治疗4周后测定大鼠最大海绵体内压(ICPmax)和平均动脉压(MAP),通过免疫荧光和Western印迹检测海绵窦内皮细胞标志物CD31,通过Western印迹检测自噬标志物Beclin1和LC3-Ⅰ/Ⅱ的蛋白表达,通过透射电镜检测海绵窦内皮细胞内自噬体的数量.结果:自噬流检测结果表明USC-Exo可以显著增加高糖培养CCEC内自噬体的数量(39.5±6.2vs12.5±5.4,P<0.05).Weste

作者:杨其运;陈婉媚;韩大愚;冯鑫;谢云;孙祥宙;邓春华

来源:中华男科学杂志 2022 年 28卷 5期

知识库介绍

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作者:
杨其运;陈婉媚;韩大愚;冯鑫;谢云;孙祥宙;邓春华
来源:
中华男科学杂志 2022 年 28卷 5期
标签:
糖尿病性勃起功能障碍 尿源干细胞 外泌体 自噬 大鼠
目的:探讨尿源干细胞来源的外泌体(USC-Exo)对糖尿病性勃起功能障碍(DED)大鼠海绵窦内皮功能和勃起功能的改善作用,并探讨其作用机制.方法:通过超速离心法从USC的培养基中提取USC-Exo,并进行鉴定.将SD大鼠海绵窦内皮细胞(CCEC)分为4组:(1)正常组;(2)高糖组;(3)Exo组:高糖培养基中加入USC-Exo(10 μg/ml);(4)3-MA 组:高糖培养基中加入 USC-Exo(10 μg/ml)和 3-MA(2 mmol/L).将 mRFP-GFP-LC3腺病毒转染CCEC后在荧光显微镜下检测细胞内自噬流的改变;通过CCK8实验检测细胞增殖能力的改变,通过Matrigel实验检测CCEC的成管能力.通过腹腔注射链脲佐菌素及阿扑吗啡实验筛选出DED大鼠,将其随机平均分为2组(n=5只/组):DED组和Exo组,另取5只同龄正常雄性大鼠作为正常组,其中正常组和DED组予阴茎海绵窦注射100μl PBS,Exo组予阴茎海绵体注射USC-Exo 100μl(浓度为1 μg/μl).治疗4周后测定大鼠最大海绵体内压(ICPmax)和平均动脉压(MAP),通过免疫荧光和Western印迹检测海绵窦内皮细胞标志物CD31,通过Western印迹检测自噬标志物Beclin1和LC3-Ⅰ/Ⅱ的蛋白表达,通过透射电镜检测海绵窦内皮细胞内自噬体的数量.结果:自噬流检测结果表明USC-Exo可以显著增加高糖培养CCEC内自噬体的数量(39.5±6.2vs12.5±5.4,P<0.05).Weste