目的 探讨体外构建含黑素的组织工程皮肤.方法 采用两步酶消化法处理健康小儿包皮,获得表皮细胞悬液,分别用人角质形成细胞(KC)无血清培养基(SFM)及改良的M254黑素细胞培养基培养KC、黑素细胞(MC),并传至第3代.将第3代KC接种于培养瓶中,48 h后加入第3代MC(MC:KC为1:10)混合培养.制备人去表皮的真皮(DED),将培养第3代的MC、KC制成细胞悬液,按照1:10的比例接种于DED表面,采用液下培养和空气-液面培养相结合的方式进行培养,2周后取培养的组织工程皮肤分别做HE染色、角蛋白免疫组化染色及Masson-Fontana染色.结果 KC、MC混合培养于培养皿5 d后,于倒置显微镜下观察到KC呈铺路石状生长,其间散布MC,且树突延伸到KC细胞间.两种细胞混合接种于DED 15 d后,HE染色显示在DED上有3～6层表皮细胞,并可见角质层,角蛋白免疫组化染色阳性,银氨染色显示基底层见黑素着色.结论 MC、KC混合接种于培养皿可构建MC和KC接触生长的单细胞层,将MC、KC接种于DED可构建含有黑素成分的组织工程皮肤.
作者：江蕾薇；陆洪光；蔡灵龙
来源：中华皮肤科杂志 2011 年 44卷 2期
