目的：探讨同时抑制 mTORC1激酶和 GSK-3β激酶活性对黑素瘤细胞4EBP1的磷酸化、帽子依赖翻译、细胞存活和凋亡的影响。方法分别采用二甲基亚砜（DMSO 组）、5 nmol/L 依维莫司（依维莫司组）、10μmol/L AR-A014418（AR-A014418组）、5 nmol/L 依维莫司联合10μmol/L AR-A014418（联合处理组）处理A375细胞，Western 印迹法检测4EBP1的磷酸化和生存素蛋白的表达，m7GTP pull-down 实验检测 eIF4E 和eIF4G 的相互作用，CCK8法和流式细胞仪分别检测 A375细胞的增殖和凋亡。结果依维莫司和 AR-A014418对4EBP1磷酸化和生存素蛋白表达均有一定的抑制作用，两组 p4EBP1-65分别为0.74±0.05和0.62±0.06，生存素蛋白分别为0.71±0.06和0.58±0.07，与 DMSO 组（分别为1.00±0.07和1.00±0.06）相比，均 P ＜0.001，且联合处理组对4EBP1磷酸化（0.14±0.04）和生存素蛋白表达（0.09±0.05）的抑制更为显著。m7GTP pull-down实验显示，依维莫司组（0.72±0.04）、AR-A014418组（0.67±0.05）、联合处理组（0.12±0.05）eIF4G 相对值均低于 DMSO 组（1.00±0.06），而4EBP1相对值均高于 DMSO 组（分别为1.98±0.16、2.32±0.17、7.58±0.25、1.00±0.08），且联合处理组 eIF4G 降低和4EBP1增加最为显著。培养24 h

作者：陈兰；荣冬芸；吴春维；曹煜

来源：中华皮肤科杂志 2016 年 49卷 4期