目的 初步探究人脂肪干细胞源外泌体对表皮细胞迁移功能的影响.方法 从正常人抽脂手术中获取的脂肪组织分离培养脂肪干细胞,采用超速离心和超滤结合的改良法分离收集细胞上清液中的外泌体,采用透射电镜、动态光散射法以及Western印迹法鉴定分离出的外泌体.采用0、50、100、200、250、300、400、500、600、800 μmol/L H2O2分别作用HaCaT细胞1h,CCK8法检测H2O2对HaCaT细胞存活率的影响.将HaCaT细胞分为正常组(无预处理)和损伤组(用100 μmol/L H2O2损伤预处理0.5 h),再将两组分别分为对照组和治疗组,治疗组与外泌体共培养,对照组不与外泌体共培养.用共聚焦荧光显微镜观察PKH26荧光标记的外泌体是否能被细胞吞噬,用划痕实验观察HaCaT细胞修复率,用Transwell实验评估细胞迁移能力.多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD检验,相关性检验采用Spearman检验.结果 透射电镜观察显示,分离所得的脂肪干细胞源外泌体是直径60～ 80 nm的茶托样纳米囊泡,而动态光散射法测量显示,分离的外泌体纯度为65.88％,表达CD63、Alix和TSG101,具有外泌体的基本特征.CCK8法显示,0～800 μmol/LH2O2处理HaCaT细胞1h后细胞存活率呈逐渐降低趋势,H2O2浓度与HaCaT细胞存活率呈负相关(r=-0.91,P＜ 0.01).共聚焦荧光显微镜观察
作者：张远远；曾悦；朱艳霞；廉翠红
来源：中华皮肤科杂志 2019 年 52卷 9期
