目的 研究利用自噬促进剂雷帕霉素和抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methlyadenine,3-MA)或渥曼青霉素调控内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)自噬,观察对其迁移、成血管和分泌能力的影响以及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、溶酶体相关膜蛋白2A(lysosome-associated membrane proteintype 2A,LAMP2A)和热休克蛋白70(heatshock protein 70,HSC70)的水平变化.方法 密度梯度离心法分离SD大鼠的骨髓单个核细胞,EGM-2MV培养基诱导、培养、扩增骨髓源性EPCs.分为四组,即雷帕霉素组,3-MA组,渥曼青霉素组和对照组,分别用10μg,/L雷帕霉素,5 mmol/L 3-MA,50 nmol/L渥曼青霉素处理EPCs 12 h,对照组加入等量培养基.分别用transwell实验及成血管实验检测EPCs迁移和成血管能力,ELISA检测细胞因子水平.Western blotting检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LAMP2A和HSC70水平.结果 (1)10 μg/L雷帕霉素抑制EPCs的迁移、成血管和分泌功能;而5 mmol/L 3-MA和50 nmol/L渥曼青霉素促进EPCs功能.(2)Western blotting显示,雷帕霉素组EPCs LC3-Ⅱ表达水平高于对照组,而LAMP2A和HSC70表达水平低于对照组;3-MA组和渥曼青霉素组则相反.结论 适度抑制EPCs自噬可促进其增殖、迁移、成血
作者:胡楠;钱爱民;孔令尚;李承龙;于小滨;陈弘;杜晓龙;李晓强
来源:中华普通外科杂志 2015 年 30卷 10期